Prevalence of Mycobacterium leprae in armadillos in Brazil: A systematic review and meta-analysis.

Understanding the prevalence of M. leprae infection in armadillos is important because of evidence from Brazil and other countries of an association between contact with armadillos and the development of Hansen's Disease (leprosy). Our aim was to characterize studies which have investigated natural M. leprae infection in wild armadillos in Brazil, and to quantify and explore variability in the reported prevalence of infection. We conducted a systematic review (PROSPERO CRD42019155277) of publications in MEDLINE, EMBASE, Global Health, Scopus, LILACS, Biblioteca Digital Brasileira de Teses e Dissertações, Catálogo de Teses e Dissertações de CAPES, and Biblioteca Virtual em Saúde up to 10/2019 using Mesh and text search terms (in English, Portuguese, Spanish, and French). The 10 included studies represented a total sample of 302 armadillos comprising 207 (69%) Dasypus novemcinctus, 67 (22%) Euphractus sexcinctus, 16 (5%) Priodontes maximus, 10 (3%) Cabassous unicinctus, and 2 (1%) Cabassous tatouay from 7 different states. Methods used included histopathology (4 studies), PGL-1 and LID-1 antigen detection (4 studies) and examination for clinical signs of disease (4 studies). Eight studies used PCR of which 7 targeted the RLEP repetitive element and 3 tested for inhibitory substances. M. leprae prevalence by PCR ranged from 0% (in 3 studies) to 100% in one study, with a summary estimate of 9.4% (95% CI 0.4% to 73.1%) and a predictive interval of 0-100%. The average prevalence is equivalent to 1 in 10 armadillos in Brazil being infected with M. leprae, but wide variation in sample estimates means that the prevalence in any similar study would be entirely unpredictable. We propose instead that future studies aim to investigate transmission and persistence of M. leprae within and between armadillo populations, meanwhile adopting the precautionary principle to protect human health and an endangered species in Brazil.

Detection of Mycobacterium leprae DNA by polymerase chain reaction in the blood and nasal secretion of Brazilian household contacts.

DNA samples from blood and nasal swabs of 125 healthy household contacts was submitted to amplification by polymerase chain reaction (PCR) using a Mycobacterium leprae-specific sequence as a target for the detection of subclinical infection with M. leprae. All samples were submitted to hybridization analysis in order to exclude any false positive or negative results. Two positive samples were confirmed from blood out of 119 (1.7%) and two positive samples from nasal secretion out of 120 (1.7%). The analysis of the families with positive individuals showed that 2.5% (n = 3) of the contacts were relatives of multibacilary patients while 0.8% of the cases (n = 1) had a paucibacilary as an index case. All positive contacts were followed up and after one year none of them presented clinical signs of the disease. In spite of the PCR sensitivity to detect the presence of the M. leprae in a subclinical stage, this molecular approach did not seem to be a valuable tool to screen household contacts, since we determined a spurious association of the PCR positivity and further development of leprosy.

Detection of Mycobacterium leprae DNA by polymerase chain reaction in the blood and nasal secretion of Brazilian household contacts

DNA samples from blood and nasal swabs of 125 healthy household contacts was submitted to amplification by polymerase chain reaction (PCR) using a Mycobacterium leprae-specific sequence as a target for the detection of subclinical infection with M. leprae.All samples were submitted to hybridization analysis in order to exclude any false positive or negative results. Two positive samples were confirmed from blood out of 119 (1.7 percent) and two positive samples from nasal secretion out of 120 (1.7 percent). The analysis of the families with positive individuals showed that 2.5 percent (n = 3) of the contacts were relatives of multibacilary patients while 0.8 percent of the cases (n = 1) had a paucibacilary as an index case. All positive contacts were followed up and after one year none of them presented clinical signs of the disease. In spite of the PCR sensitivity to detect the presence of the M. leprae in a subclinical stage, this molecular approach did not seem to be a valuable tool to screen household contacts, since we determined a spurious association of the PCR positivity and further development of leprosy.

Detection of Mycobacterium leprae DNA by polymerase chain reaction in the blood of individuals, eight years after completion of anti-leprosy therapy

Thirty eight patients with indeterminate leprosy (HI), at least 4 to 6 years after discharge from multibacillary (MB) or paucibacillary (PB) schemes of anti leprosy multidrug therapy (MDT), were submitted to traditional diagnostic procedures for leprosy and to polymerase chain reaction (PCR) analysis of different clinical samples for detection of Mycobacterium leprae DNA. No significant difference was observed for any of the parameters analyzed between PB or MB schemes of treatment and no indications were found for more efficient outcome of HI using the MB scheme. Remarkably, 18 (54.5 percent) of the individuals were PCR positive in at least one of the samples: positivity of PCR was highest in blood samples and four individuals were PCR positive in blood and some other sample. Upon comparison of PCR results with clinical and histopathological parameters, no correlation was found between PCR-positivity and eventual relapse. This is the first report on detection of M. leprae DNA in PB patients, more than half a decade after completion of MDT, suggesting that live bacilli are present and circulating much longer than expected, although reinfection of the individuals can not be excluded. Overall, we feel that because of the high sensitivity of the assay, extreme care should be taken about association of PCR results, efficacy of treatment and disease status

Aplicação da tecnica de PCR (polymerase chain reaction) na pesquisa da hanseniase / ?

Embora com a introdução da poliquimioterapia, a prevalencia da hanseniase esteja diminuindo a nivel mundial, a doença ainda é considerada um problema de saude publica em muitos paises. No Brasl, a situação é de muita preocupação, pois o pais ocupa o segundo lugar no mundo em termos de numero de casos registrados. Com o objetivo de contribuir no controle e na erradicação desta endemia, aplicamos a tecnica de reação de polimerase em cadeia (PCR) diretamente em amostras clinicas de pacientes hansenianos, na tentativa de detecção da infecção subclínica, um dos mais importantes problemas para o controle epidemiologico da doença. Utilizando um sistema de amplificação especifico para M. leprae, foi possivel detectar em um primeiro rastreamento, a presença de bacilos em biopsia, linfa e sangue de 87% dos pacientes virgens de tratamento com uma positividade de 84% nos pacientes multibacilares e 100% nos paucibacilares, sugerindo a utilização do PCR como metodo de apoio para diagnostico. Diferentes protocolos para tratamento de amostras clinicas não invasivas tais como mucosa nasal e pêlo foram padronizados e apos a realização da PCR, detectamos a presença de bacilos em 87,5% dos pacientes paucibacilares. Concluimos que pêlo é uma amostra com alto potencial para detecção de infecção subclinica, uma vez que permite a detecção de M. leprae mesmo quando coletado de areas não lesadas da pele. Através da detecção de M. leprae em mucosa nasal e sangue de um individuo com suspeita clinica de hanseniase, demonstramos a utilização do PCR como metodo de suporte laboratorial a clinica em casos de dificil diagnostico. Mostramos ainda um diagnostico precoce de possivel recidiva em paciente paucibacilar apos longo tempo de tratamento, sugerindo a utilização da tecnica como metodo de apoio na diferenciação entre recidiva e reação reversa. Finalmente, avaliamos a eficacia da multidrogaterapia em individuos com 4 a 6 anos de alta terapeutica através da comparação entre avaliação clinica e laboratorial com PCR em sangue, linfa e pêlo, demonstrando a presença de DNA amplificavel em 54% dos individuos. Detectamos bacterias no sangue de 71% destes individuos sem sintomatologia clinica, sugerindo a existencia de bacterias viaveis. Embora a tecnica de PCR tenha apresentado alta sensibilidade e especificidade sugerindo a utilização para detecção sub-clinica da doença, a possibilidade de um carreamento passivo de bacilos em certas amostras e a falta de correlação entre PCR...

Desenvolvimento de método para extração de acidos nucleicos de micobacterias e utilização da técnica de PCR (polymerase Chain Reaction) para o diagnostico de hanseniase / ?

Desenvolvemos durante este trabalho um eficiente protocolo para a extração de acidos nucleicos de micobacterias. A alta qualidade do DNA extraido por este procedimento foi mostrada através de eletroforese em gel de agarose, espectrofotometria, construção de bibliotecas genômicas de Mycobacterium leprae, M. tuberculosis e M. bovis-BCG, bem como através de sua utilização como alvo para a amplificação com "Polimerase chain reaction" (PCR). Utilizando oligonucleotideos para uma sequencia repetitiva, específica de M. leprae localizada na região 3', não-codificante do antígeno de 65 kDa, obtivemos uma amplificação altamente sensível e especifica, tanto com DNA de M. leprae purificado quanto com DNA obtido de amostras clinicas de pacientes com hanseniase, otimizando para isto, protocolos para o processamento das diferentes amostras clínicas. Um total de 27 pacientes com espectro clinico e indice baciloscopico definido foram rastreados por PCR para a presença ou ausencia de M. leprae utilizando como amostras clinicas, biopsias, linfa e células mononucleares isoladas do sangue oeriferico. Os resultados foram analisados por visualização em gel de eletroforese e por hibridização com oligonucleotideos ou com um fragmento clonado da sequencia repetitiva. 25 pacientes foram positivos para a infecção com M. leprae em pelo menos um dos testes e umja avaliação preliminar do uso de PCR foi realizada.